Plateforme Ariadne : Criblage à Haut débit et Haut contenu

ARIADNE regroupe deux plateformes, ARIADNE-Criblage et ARIADNE-ADME, travaillant de manière indépendante mais complémentaire. Leur objectif est de découvrir des petites molécules chimiques utiles en thérapeutique ou pour explorer le vivant, et de caractériser leurs propriétés ADME. ARIADNE-Criblage regroupe un ensemble d’expertises et d’équipements dédiés au criblage de perturbateurs biologiques tels que des petites molécules chimiques ou des librairies de siRNA. ARIADNE-ADME permet quant à elle de quantifier les paramètres qui caractérisent la capacité des molécules à être Absorbées, Distribuées, Métabolisées et Eliminées in vivo (ADME).

ARIADNE-Criblage est constituée de trois plateaux. Le plateau HTS permet de miniaturiser des essais pharmacologiques cellulaires ou non, et de cribler à haut débit des librairies chimiques. Il permet d’évaluer à moyen débit l’activité de séries chimiques en cours d’optimisation et d’explorer leur mécanisme d’action. Les plateaux pour le High Content Screening HCS-L2 et HCS-L3 permettent de réaliser à haut débit et à haut contenu des criblages par microscopie quantitative dans un environnement de sécurité L2 ou L3.

Savoir-faire et services proposés :

La plateforme regroupe un ensemble d’expertise et d’équipements dédiés au criblage de petites molécules chimiques ou des librairies de siARN. La chaine d’équipements permet l’automatisation complète ou partielle des étapes de criblage, depuis la mise en plaque des perturbateurs provenant de chimiothèques ou de siRNA-thèque, jusqu’à la lecture de résultats. Le savoir-faire et la technicité du personnel permettent le développement de tests à haut-débit, miniaturisés (plaques 96, 384 puits) et automatisés pour le criblage in vitro, in bacterio ou in cellulo, sur cibles ou phénotypique. ARIADNE bénéficie de l’accès à des chimiothèques notamment la chimiothèque régionale d’environ 200.000 molécules chimiques, de banques de siARN ou de miARN. La plateforme possède également une expertise de marquage de cellules pour la domiciliation cellulaire, sur les approches CRISPR Cas9.

Les équipements sont localisés dans des laboratoires de sécurité biologique de niveau 1 à 3. Le plateau HTS en LNSB1 permet la gestion des librairies et le criblage à haut débit sur des lecteurs de plaques multimodes (avec des mesures en fluorescence, luminescence, absorbance …).  Les plateaux HCS pour le criblage à haut contenu, installés grâce à l’Equipex ImagInEx BioMed et au soutien du Conseil Européen de la Recherche, reposent sur une technique de microscopie confocale automatisée et quantitative. Un premier système d’imagerie (IN cell Analyzer 6000) est entièrement automatisé en LNSB2. Un second système (IN cell Analyzer 6500) est disponible en LNSB3. Cette technologie dite “non destructrice” autorise le suivi dans le temps du même échantillon à la fois à court terme (phénomènes dynamiques) et à long terme (cinétique) et permet de mesurer plusieurs paramètres simultanément sur un même échantillon biologique.

De nombreux tests peuvent être mis en œuvre : tests enzymatiques, tests cellulaires phénotypiques ou sur cible, interactions protéine-protéine in vitro ou in cellulo, Thermal Shift Assay (TSA) et suivi d’engagement de cible… L’utilisation de la technologie acoustique Echo pour le transfert de nanogouttes de liquide permet de préparer les plaques de criblage et de tester des molécules en combinaison et en dose réponse.

Les demandes destinées à ARIADNE-Criblage peuvent être adressées par mail au responsable scientifique. Elles feront l’objet d’une discussion avec le porteur de projet puis d’une étude de faisabilité. Les projets répondant au cahier des charges seront acceptés dans l’ordre d’arrivée. Selon les cas, le personnel d’ARIADNE-Criblage peut former les utilisateurs pour un accès autonome mais payant à la plateforme, établir des devis pour un service, collaborer à une recherche de financement… Chaque projet est suivi par un membre du comité de pilotage et par le responsable technique.

Dans le cadre d’un accord partenarial, les projets peuvent être poursuivis avec les experts de Ariadne-Criblage ou leurs collaborateurs vers la caractérisation de cibles et l’optimisation des modulateurs : identification et engagement de cible, chimie médicinale, mesure des propriétés physicochimiques, études ADME et pharmacocinétique chez les rongeurs. Ces derniers travaux peuvent être réalisés avec la plateforme ARIADNE-ADME.